末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 |  9027-67-2

其他中文名稱 ： 末端轉(zhuǎn)移酶；胸-腺五肽

英文名稱 ： TDT

其他英文名稱 ： Terminal Transferase；Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

C A S ： 9027-67-2

分子量 ： 60000

保 存 ： -20°C

級(jí) 別 ： BR

來 源 ： 大腸桿菌細(xì)胞，含有編碼牛胸腺末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶的基因

濃 度 ： 20u/ul

活性定義 ： 是指在37℃、60分鐘內(nèi)將1nmol脫氧核糖核酸摻入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量

酶活性分析混合物 ： 66mM二甲胂酸鉀（PH7.2），1mM CoCL2, 0.01%(v/v) Triton X-100, 10uM oligo(dT)10, 1mM dTTP和0.4MBq/ml[3h]-dTTP

保存液組分 ： 100mM 醋-酸鉀（PH6.8)、2mM β-巰基乙醇，0.01%(v/v) Triton X-100和50%(v/v)甘油

5×反應(yīng)緩沖液 ： 1M 二甲胂酸鉀、125mM Tris，0.05%(v/v) Triton X-100，5mM CoCL2(PH7.2,25℃)

抑制劑 ： 金屬螯合劑、銨、氯化物、碘化物和磷酸鹽離子

失 活 ： 加入EDTA，70℃加熱10分鐘

質(zhì)量保證 ： 測(cè)試表明無內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染

注 意 ： 由于含有CoCL2，TdT反應(yīng)緩沖液不能與下游應(yīng)用兼容，需采用柱離心法或苯-酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法純化反應(yīng)混合物，除去CoCL2

性 狀 ：懸浮液，重組酶。末端轉(zhuǎn)移酶（Terminal transferase, TdT）是一種無需模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3'羥基端。帶有突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子均可作為TdT的底物。一般操作是：先在載體上打開一單個(gè)位點(diǎn)，把它與末端轉(zhuǎn)移酶和某一dNTP（如dATP）一起保溫以使添尾，另一待插入的外源DNApian段則用互補(bǔ)的用同法添dNTP（dTTP）用同法添尾。接著使上述兩種都接上互補(bǔ)單鏈尾的DNApian段彼此退火，使形成一雜合載體來轉(zhuǎn)化受體菌。雜合載體中的裂隙或切口可被受全菌所修復(fù)。

用 途 ： 生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物；DNA的3'末端標(biāo)記