晶抗生物人C3SPelisa試劑盒操作步驟介紹如下
操作步驟:
1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2、根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37°C溫育30分鐘。
6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,
7、每孔加入底物A、B各50u，輕輕振蕩混勻，37℃C溫育5分鐘。避免光照
8、取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,
9、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
操作注意事項(xiàng):
1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存
2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6、底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,
7、加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。一般來(lái)講，96T能檢測(cè)90個(gè)樣本，48T能檢測(cè)42個(gè)樣本，這里面需要用標(biāo)樣來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以各位需要做實(shí)驗(yàn)的老師們，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買ELISA試劑盒的時(shí)候注意，需要做多少個(gè)樣本，在決定買多大規(guī)格的試劑盒，以免做實(shí)驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費(fèi)!
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