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ELISA試劑盒實驗測定標(biāo)本分化
更新時間:2020-02-20   點擊次數(shù):1707次

(1)標(biāo)本溶血 

    
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA測定中,會導(dǎo)致非特異性顯色,攪擾測定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果,標(biāo)本收集時有必要注意避免溶血。
    
(2)標(biāo)本受細菌污染 
    
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而攪擾測定成果。
    
(3)標(biāo)本保存不妥
    
在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、乃至構(gòu)成假陽性;標(biāo)本放置時間過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。

為戰(zhàn)勝上述攪擾,ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集;如不能當(dāng)即測定,5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不行激烈振蕩。

(4)標(biāo)本凝集不全
    
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液收集后1/2~2h開端凝結(jié),18~24h*凝結(jié)。臨床查驗工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開端凝結(jié)時即強行離心別離血清,此刻的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊,易構(gòu)成假陽性成果;

這類情況于次日復(fù)查時因血凝已*,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查成果變?yōu)殛幮?。為避免上述攪擾效果,處理的辦法是血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清,或標(biāo)本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中參加適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />    
(5)標(biāo)本管中增加物質(zhì)的影響
    
抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有一定攪擾效果。

通過以上的剖析和總結(jié),臨床查驗ELISA測定中出現(xiàn)假陽性或假陰性等過錯的成果,掃除ELISA試劑盒要素和操作要素,再有就是從標(biāo)本要素進行剖析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施掃除攪擾,從而保證檢測成果的準(zhǔn)確性。

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