上海晶抗生物科技有限公司常年供應(yīng)ELISA試劑盒，為保證實(shí)驗(yàn)的成功，運(yùn)用ELISA試劑盒時(shí)一定要注意相關(guān)的事項(xiàng)，今日，我們首要介紹人白介素ELISA試劑盒操作步驟。
1． 確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2． 將倍比稀釋的規(guī)范品各0.1ml順次參加一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔參加。
3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反響90分鐘。
4． 反響后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗刷2次。
5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次，每次浸泡1分鐘左右。
7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液，37℃避光反響，反響過程中，要常常的調(diào)查，當(dāng)肉眼可見規(guī)范品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時(shí)，即可參加TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反響長(zhǎng)不要超越30分鐘）。
10． 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
11． 依據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也能夠運(yùn)用各種應(yīng)用軟件來核算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。
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