ELISA試劑盒測(cè)定法測(cè)定抗體
ELISA試劑盒原理
其基本原理可概括為：將特異的抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)和酶學(xué)催化反應(yīng)相結(jié)合，以酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級(jí)免疫學(xué)反應(yīng)。因此，酶免疫技術(shù)一般均有兩部分組成，即一次或數(shù)次免疫學(xué)反應(yīng)和一次酶促反應(yīng)?？乖⒖贵w發(fā)生特異結(jié)合過程中，設(shè)法引入酶結(jié)合物，如酶標(biāo)記的抗抗體，然后加入酶的底物，在酶催化下生成有色產(chǎn)物，反映出被測(cè)定抗原或抗體的量。
ELISA試劑盒操作流程：
檢測(cè)抗體多用間接型elisa。以純化抗原包被載體，經(jīng)4℃過夜，以無關(guān)蛋白封閉至少2小時(shí)以上，加入待測(cè)樣品，室溫孵育1小時(shí)，洗滌干凈后加酶標(biāo)抗體，再經(jīng)室溫孵育、洗滌后，以底物顯色，顯色到一定程度終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上讀結(jié)果或以肉眼判斷。
類型：elisa具體方法的類型繁多，試劑的標(biāo)準(zhǔn)化問題還未zui后解決，溫育的時(shí)間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)等都是影響測(cè)定的因素。但參考以上基本過程，無論怎樣變化，均離不開抗原-抗體反應(yīng)、酶標(biāo)抗體的免疫學(xué)反應(yīng)及酶催化作用。
特點(diǎn)：1、敏感性高，可檢出濃度在ug~mg/ml水平；2、特異性強(qiáng)；3、重復(fù)性好；4、快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)。
實(shí)驗(yàn)條件
固相載體：可作為固相載體的物質(zhì)很多，如：纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等?？梢愿鞣N形式出現(xiàn)；試管、微量反應(yīng)板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯制品，其吸附性。固相包被的機(jī)制一般不外乎物理吸附和共價(jià)交聯(lián)，
封閉：以無關(guān)蛋白占據(jù)載體上未被包被的空隙，常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測(cè)樣品：稀釋度要合適，濃度太大會(huì)發(fā)生非特異性吸附造成假陽(yáng)性，過分稀釋會(huì)影響抗原-抗體之間的免疫學(xué)反應(yīng)。選擇zui適稀釋度，在實(shí)驗(yàn)體系中取光密度在1.0左右的稀釋度為宜。
酶結(jié)合物：使用高質(zhì)量的酶結(jié)合物是elisa成功的關(guān)鍵。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
酶聯(lián)免疫技術(shù)的試劑標(biāo)準(zhǔn)化問題尚未完*，溫育過程的時(shí)間、溫度、洗滌液的種類及洗滌次數(shù)都是影響zui后測(cè)定的因素。為使實(shí)驗(yàn)得到滿意的結(jié)果，在操作過程中應(yīng)作到
1、每次試驗(yàn)都必須設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
2、封閉要*。
3、洗滌要測(cè)定。
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